Журнал медицинских методов диагностики
Открытый доступ

Абстрактный

Низкоплотные области ДНК в сперме человека выглядят как вакуоли после полупрозрачного окрашивания реактивным синим 2

Сатро Канеко, Джоджи Ёсида и Киёси Такамацу

Человеческая сперма часто содержит вакуоли, и поэтому необходимо определить, ответственны ли вакуоли в хромосомной области за ухудшение ДНК. С этой целью в настоящем исследовании была разработана новая клиническая техника исследования, полупрозрачное окрашивание, для визуализации вакуолей. Сильно разбавленный реактивный синий 2 (RB2, 100 пмоль/л) слабо окрашивал головку сперматозоида, выявляя полупрозрачное голубоватое тело с бесцветными пятнами. Дифференциальный интерференционный контраст показал вакуоли как затененные рельефные изображения. В том же поле зрения локализация и форма бесцветных пятен совпадали с затененными рельефными изображениями.

Двойное окрашивание RB2 и флуоресцентным красителем ДНК предполагает, что вакуоли могут включать свободную или низкоплотную ДНК. Полученные результаты выявили важные проблемы в клинических вспомогательных репродуктивных технологиях (ВРТ), то есть, были задействованы различные вакуоли независимо от нормальности контура или подвижности. Характеристики были разделены на три категории: ноль или одна маленькая вакуоль; несколько спорадических вакуолей разных размеров; и одна большая вакуоль. Более того, этапы обработки in vitro, такие как центрифугирование в градиенте плотности и последующее всплытие, не могли изолировать сперму без вакуолей.

Поскольку до сих пор неизвестно, просто ли вакуоли выталкивают ДНК в окружающую среду, не повреждая ее, или пустая область является следствием деградации ДНК, полупрозрачное окрашивание для одновременной визуализации контура и вакуолей представляет собой важный шаг в цитодиагностике перед ВРТ, позволяющий определить, пригодна ли популяция сперматозоидов для использования в клинической ИКСИ.