Журнал клинической и клеточной иммунологии
Открытый доступ

Абстрактный

Количественный анализ липосомального белка теплового шока 70 (Hsp70) в крови пациентов с опухолями с использованием нового метода LipHsp70 ELISA

Стефани Бройнингер, Янина Эрл, Клеменс Кнапе, Софи Гюнтер, Ивонн Регель, Франц Рёдель, Удо С. Гайпль, Джун Торстейнсдоттир, Лидия Джаннитрапани, Энн М. Дикинсон и Габриэле Мультхофф

Повышенные уровни стресс-индуцируемого белка теплового шока 70 (Hsp70) в периферическом кровообращении были зарегистрированы для многих опухолевых образований. В соответствии с этими результатами мы показали, что мембранно-положительные опухолевые клетки Hsp70 активно высвобождают Hsp70 в липидных везикулах, подобных экзосомам. Поскольку большинство коммерческих иммуноферментных анализов Hsp70 (ELISA) не валидированы для обнаружения липосомального Hsp70 в сыворотке, был создан ELISA lipHsp70 с использованием моноклонального антитела cmHsp70.1 в качестве реагента для обнаружения. Сообщалось, что это антитело распознает свободный и связанный с мембраной Hsp70 на живых опухолевых клетках.
Валидация ELISA показала высокую точность анализа и линейность в диапазоне концентраций 0,36-17,4 нг/мл. Сравнение восстановления спайкового Hsp70 в образцах буфера и сыворотки показало значительно лучшее восстановление с использованием lipHsp70 ELISA по сравнению с коммерческим ELISA. Что касается липид-ассоциированного Hsp70, то было обнаружено в десять раз более высокое восстановление с использованием lipHsp70 ELISA по сравнению с коммерческим ELISA. Анализ образцов крови здоровых добровольцев (n=114) показал среднюю концентрацию Hsp70 в сыворотке 6,4 ± 2,7 и 2,8 ± 1,3 нг/мл соответственно с использованием lipHsp70 и контрольного ELISA. Не было обнаружено существенных возрастных различий в уровнях Hsp70 в сыворотке. lipHsp70 ELISA одинаково подходит для сыворотки и плазмы, а измеренные концентрации Hsp70 не были затронуты приемом пищи, повторным замораживанием и оттаиванием образца или умеренным гемолизом. Сравнение уровней Hsp70 у пациентов с раком головы и шеи, легких, колоректальным раком, раком поджелудочной железы, глиобластомой или гематологическими злокачественными новообразованиями и у здоровых добровольцев выявило значительно более высокие уровни у пациентов с опухолями.
Подводя итог, можно сказать, что lipHsp70 ELISA представляет собой высокочувствительный и надежный метод измерения липосомального и свободного Hsp70 в сыворотке и плазме и, таким образом, может стать полезным инструментом для обнаружения опухолей и мониторинга клинических результатов у пациентов.