Журнал гликомики и липидомики
Открытый доступ

Абстрактный

Структурный анализ N -гликанов, прикрепленных к Na + /K + -АТФазе свиных почек

Mayumi Kanagawa, Kana Matsumoto, Noriyuki Iwasaki, Yutaro Hayashi and Yoshiki Yamaguchi

Na+/K+-АТФаза — это мембранный гликопротеин, состоящий из субъединиц α, β и γ, создающий ионные градиенты через плазматические мембраны. Ионная перекачка в основном осуществляется субъединицей α, в то время как гликозилированная субъединица β прочно связывается с субъединицей α для сборки насоса и играет важную роль в стабилизации и созревании Na+/K+-АТФазы. Накапливающиеся данные свидетельствуют о том, что N-гликаны субъединицы β способствуют межклеточному взаимодействию, а плотность клеточных контактов модулируется разветвлением N-гликанов. Однако функция N-гликанов не полностью изучена из-за отсутствия подробной информации о структуре олигосахаридов. В данной работе мы проводим профилирование гликозилирования N-гликанов, прикрепленных к Na+/K+-АТФазе свиных почек, чтобы лучше понять механизм адгезии клеток, опосредованной Na+/K+-АТФазой.

Мы очистили Na+/K+-АТФазу из наружной мозговой части свиной почки до однородности и солюбилизировали ее с помощью детергента C12E8. Полученный таким образом фермент был идентифицирован как подтип α1β1 с помощью анализа триптических гидролизатов методом ЖХ-МС/МС. В ходе анализа методом МС мы обнаружили, что Lys456 субъединицы α был частично модифицирован 4-гидроксиноненалем, продуктом перекисного окисления альдегидных липидов. Три участка N-гликозилирования на субъединице β1 были подтверждены как полностью занятые с помощью анализа хода ферментативного дегликозилирования, контролируемого методом SDS-PAGE. Профилирование методом ВЭЖХ пиридиламинированных олигосахаридов, полученных из Na+/K+-АТФазы, показало, что преобладают олигосахариды с высоким содержанием маннозы, в то время как большинство менее распространенных олигосахаридов сложного типа покрыты остатками галактозы. Гликаны не были обнаружены на четырех консенсусных сайтах N-гликозилирования на субъединице α1. Мы кратко обсуждаем возможность того, что олигомеризация Na+/K+-АТФазы через β-β взаимодействия собирает N-гликаны и способствует межклеточной адгезии.