Ферментная инженерия
Открытый доступ
ISSN: 2329-6674
ISSN: 2329-6674
Дженнифер Круз
Параспорин-2 (PS2Aa1) — это токсин, вырабатываемый Bacillus thuringiensis , который показал высокую цитотоксичность против линий раковых клеток, таких как: MOLT-4, Jurkat, Sawano и HepG2. Соответственно, для объяснения его цитотоксического эффекта была предложена модель многоступенчатого механизма: сначала PS2Aa1 связывается с рецепторами, закрепленными на GPI, или другими белками в мембране; затем концентрированные токсины олигомеризуются, после этого образуются трансмембранные поры, вызывающие повреждение проницаемости мембраны (1). Однако механизм его действия до сих пор не выяснен. Поэтому в данной исследовательской работе мы провели фрагментацию PS2Aa1, синтезирующего пептиды, с помощью стратегии Fmoc. Мы получили 3 пептида, полученных из разных доменов PS2Aa1, называемых: P264-G274, Loop1-PS2Aa и Loop2-PS2Aa. Кроме того, были получены 3 производных P264-G274 (P264-V268K, P264-V268W и P264-V268H), 1 производное Loop1-PS2Aa (Loop1-Y5K) и 1 производное Loop2-PS2Aa (Loop2-N4W). Изменения в каждом остатке подтверждались увеличением заряда и гидрофобности соединений. Вторичные структуры пептидов были подтверждены спектрами кругового дихроизма (КД). Все пептиды PS2Aa1 демонстрировали вторичную структуру α-спирали с максимальной полосой поглощения при 190 нм и двумя минимальными полосами поглощения между 205-220 нм. Кроме того, была определена степень гемолиза человеческих эритроцитов, показывающая, что все оцененные пептиды имели HC 50 ниже 100 мкМ, с менее чем 24% гемолиза по сравнению с положительным контролем (TX-100 0,1 %). Наконец, целые пептиды проявили активность против SW480 ; подчеркивая, что P264-V268K был наиболее активным с IC 50 5,716 мкМ. 5-фторурацил, химиотерапевтический препарат, был взят в качестве положительного контроля. Эти результаты ясно демонстрируют, что P264-V268K обладает большой способностью в лечении клеток рака толстой кишки SW480 с безопасным, селективным и, вероятно, новым способом действия.