Журнал хроматографии и методов разделения
Открытый доступ
ISSN: 2157-7064
ISSN: 2157-7064
Васконселос Андре Белико де, Оливейра Джамиль Сильвано де и Лагарес Моник де Альбукерке
Семенная жидкость — это жидкий компонент спермы, обеспечивающий безопасную среду для сперматозоидов. Семенная плазма имеет особенность, общую для многих других жидкостей организма, характеризующуюся высоким динамическим диапазоном белков, который визуализирует физиологические и биохимические процессы спермы. Как и в других жидкостях организма, в семенной плазме удобно различать белки и небелки. Метод молекулярной хроматографии исключения представляет важные моменты для сохранения конституционных белков, в дополнение к обычному явлению; гидрофобные взаимодействия исключения могут обеспечить более высокое разрешение на хроматограмме и не обеспечивают неспецифических взаимодействий между белковыми структурами. Целью было хроматографическое исследование профиля для простого изучения белков семенной плазмы домашних животных (жеребцов, собак и коз) методом гель-фильтрационной хроматографии. Образцы (белки семенной плазмы) хроматографировали в Superose 12 HR 10/30, уравновешенном 25 мМТрис-HCl (Sigma) с 0,15 М NaCl (Sigma), pH 7,4 при комнатной температуре в системе быстрой жидкостной хроматографии (FPLC-система) с использованием скорости потока 0,5 мл.мин-1. Было молекулярное разделение значительно различающихся молекулярных масс, что делает возможным логарифмическую зависимость между молекулярной массой и объемом элюирования. Калибровка колонки для гель-фильтрации привела к уравнению y = ax + b, где значения a и b были 5,43 и -2,175 соответственно, а соответствующие ошибки были 0,115 и 0,256 соответственно. Экспериментальная ошибка составила менее 5% для большинства молекулярных масс белков. Работа показала, что метод гель-фильтрационной хроматографии обеспечивает превосходную аналитическую повторяемость и, следовательно, может стать ценным инструментом для предварительного изучения семенной плазмы.